Octyl-Sepharose 4FF 的重力柱说明书
货号：YA2610
规格：1*1mL / 1*5mL / 5*1mL / 3*1mL+1*5mL / 5*5mL
保存：2-8℃
产品说明：
   Octyl-Sepharose 4FF 属于脂肪族疏水作用介质，配基通过不带电和化学性质十分稳定的醚键连
接到琼脂糖微球上。疏水层析介质主要通过分子表面疏水性差别进行分离纯化。广泛用于生物制药
和生物工程下游蛋白质和多肽的分离纯化。
表 1：介质性能参数



纯化流程：
1、Buffer 的准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45 μm 滤膜过滤。
平衡/洗杂液：0.05M 磷酸盐，1.7M 硫酸铵，pH7.0
洗脱液：0.05M 磷酸盐，pH7.0
注：疏水层析介质缓冲液可根据不同介质及纯化物质不同做适当改变，原则上高盐上样低盐洗
脱。
2、样品准备
样品在上样前建议离心或用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止
堵塞柱子。
样品中盐浓度跟平衡液相同，通常为 0.5-2.0M 硫酸铵。
3、样品纯化
Octyl-Sepharose 4FF 重力柱使用请参考以下说明，各溶液用量均按照柱体积计算（柱体积是指
填料体积）。
1)水洗：将Octyl-Sepharose 4FF 重力柱固定在铁架台上，依次去掉上端塞和下端塞，使液体流出。
当柱内剩余液面略高于上筛板，向管中加入 5-10 个柱体积的去离子水，去除残留的保护液。
2) 平衡：当液面略高于上筛板，向柱管中加入 5 个柱体积的平衡液，进行平衡，使填料处于与目
的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
3) 上样：将样品加到平衡好的重力柱中，样品保留时间至少 2min，保证目的蛋白与介质充分
接触，提高目的蛋白的回收率。收集流出液，用于 SDS-PAGE 分析蛋白质的结合情况，在出现问题时，
更方便寻找解决问题的方案。
4) 洗杂：用 10-15 倍柱体积的洗杂液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
5) 洗脱：使用 5-10 倍柱体积的洗脱液进行目的蛋白的洗脱，分段收集，每一个柱体积收集一管，
分别检测，既可以保证所有结合的目的蛋白被洗脱，又可以得到高纯度和高浓度的蛋白。
注：疏水作用随着温度的降低而降低。可采用非极性有机溶剂如 40-50%乙二醇、30%异丙醇或 1% 去污剂（Triton X-100）洗脱。

6)水洗：依次使用 2-3 倍柱体积的 30%异丙醇和 5-10 倍去离子水清洗，最后再用 5 倍柱体积的 20%
的乙醇平衡，然后保存在等体积的 20%的乙醇中，置于 4℃保存，防止填料被细菌污染。
4、SDS-PAGE 检测
将纯化过程中收集的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用 SDS-PAGE
检测纯化效果。
填料清洗
CIP（Cleaning-In-Place）清洗
疏水层析树脂可以重复使用，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速
和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行 CIP 清洗。
A、去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法
用 2 倍柱体积的 1M NaOH 溶液进行清洗(至少浸泡 4 小时)，用 5-10 倍柱体积的去离子水清洗。
B、去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 3-4 倍柱体积的 1% TritonX-100 的 0.1M 醋酸盐清洗（至少 1-2 小
时），用 5-10 倍柱体积的去离子水清洗。