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用于使小鼠胚胎干细胞体外向胰岛样结构分化
 小鼠胚胎干细胞体外分化为胰岛样结构
目前已经建立了一种方法，可以将小鼠ES细胞分化为能分泌胰岛素的胰岛样结构。首先培养ES细胞形成EBs，之后在基础培养基中添加ITS添加物，以富集那些表达中间细丝蛋白－Nestin的细胞。这些EBs被消化成为单个细胞后，用添加N2添加物和基础纤维原细胞生长因子（FGF－b）的培养基培养。当去除培养基中的FGF－b，细胞会分化为胰岛样细胞团。在分化的最后阶段添加烟碱和B27添加物会增加胰岛素内分泌细胞的产量。
用免疫荧光法对这些细胞进行染色会发现与正常的胰岛相似，内层的细胞分泌胰岛素，外层的细胞分泌胰高血糖素。可以用ELISA法检测胰岛素分泌的情况。
 

左下图: insulin-secreting islet-like structures (unstained)
右下图: insulin-secreting islet-like structure (stained with anti-insulin antibody)
 
 
 
操作步骤　　　　　　　　　　　　　　　　使用产品
未分化的ES细胞　　　　　　　　LIF（02740），gelatin（07903）
↓　　　　　DMEM（36250）和添加物（07000，07100，07500，07600）
↓　
悬浮培养，生成EBs　　　　　　　　　　　FBS（06905/06955）
↓　　　　　　　　　　　　　超低粘附的培养皿（27145）
↓
富集nestin阳性细胞　　　　基础培养基A（05801），ITS-A（07151）
↓　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓　　　　　　　　　　　　
分散细胞并使用含有FGF-b和添加物　　　　基础培养基A（05801），N2-A (07152),
的培养基扩增细胞　　　　　　　　　　　FGF-b（02634），B27（07153）
↓　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
分化为胰岛样细胞团　　　　　　　　基础培养基A（05801），N2-A (07152),
B27（07153），烟碱（07154）
↓　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
免疫荧光染色和ELISA检测胰岛素 　　　　　　抗胰岛素抗体（01450）
 

 01450 抗胰岛素多克隆抗体（1ml）
 27145 超低粘附培养板（6孔）
 06905 ES-Cult® 胎牛血清(促分化),100ml
 06955 ES-Cult：®胎牛血清(促分化),500ml
 05801 ES-Cult® 基础培养基A（500ml）
 07151 ITS-A添加物（5ml,100X）
 07152 N2-A添加物（5ml,100X）
 07153 B27添加物（10ml,50X）
 07154 烟碱（100g）